Исследование биологического материала методом пцр. Что такое анализ крови на пцр, и зачем он нужен

ПЦР диагностика — это методика, основанная на применении полимеразной цепной реакции, с помощью которой можно обследовать человека на инфекционные и наследственные заболевания. Анализы ПЦР на 12 инфекций показывают результат, несмотря на то, остро протекает заболевание или хронически. Некоторые специалисты считают ПЦР 12 обязательным анализом и не ставят без него окончательный диагноз. Результаты могут быть положительными даже задолго до появления симптоматики болезни.

В 20 веке Кэри Мюллис из США открыл явление полимеразной цепной реакции. В настоящее время метод ПЦР является золотым стандартом в некоторых сферах медицины. Метод является максимально эффективным для выявления болезни в активной стадии, поскольку бывают случаи, что в активной стадии обычные методы не дают такого точного результата.

Диагностика инфекционных процессов при помощи ПЦР достаточно актуальна в современном мире. Преимуществами данного вида обследований являются следующие моменты:

1. Обнаружение инфекционного возбудителя в анализах. Анализ предполагает выявление ДНК или РНК инфекционного агента.
2. Практически исключены ложные и ошибочные реакции.
3. Методика ПЦР 12 максимально чувствительная. Благодаря данному методу можно обнаружить даже единичные клетки инфекционных агентов.
4. Результат ПЦР на скрытые возбудители готов уже через 4 часа после проведения процедуры.
5. Способность обнаружения инфекционных агентов без отсутствия характерной симптоматики для заболевания. Метод достаточно эффективен и по происшествии конкретной болезни.

В современном мире ПЦР диагностика инфекций развивается ускоренными темпами. Методика активно совершенствуется. Появляются новые подвиды обследования ПЦР. Благодаря развитию данного метода обследования он становится максимально доступным широкому кругу людей, а стоимость при этом постепенно изменяется.

Основа полимеразной цепной реакции

Метод ПЦР проводится исключительно в лабораторных условиях. Для его осуществления используются специальные ферменты, которые увеличивают в несколько раз структуру ДНК и РНК больного. Должно образоваться такое число ДНК и РНК, чтобы можно было провести визуальный анализ. Во время обследования происходит копирование того участка РНК или ДНК, который идеально подходит под требуемые условия.

В лаборатории существует соответствующая база данных, в которой указано точное строение различных инфекционных агентов. Благодаря методу ПЦР можно не просто увидеть возбудителя, но и подсчитать его количественное соотношение.

ПЦР-диагностика предполагает и определенные новшества, среди которых можно выделить следующие:

• введение мутаций;
• соединение отдельных фрагментов ДНК;
• определение отцовства и др.

Инфекции, выявляемые ПЦР-анализом

ПЦР диагностика может выявить следующие инфекционные процессы:

• гепатиты следующих разновидностей: А, В, С, G;
• вирус Эпштейн-Барра, возбудитель инфекционного мононуклеоза;
• цитомегаловирус;
• микобактерии туберкулеза;
• герпес 1 и 2 типа;
• многие инфекции, передающиеся половым путем: уреаплазмоз, гарднереллез, хламидиоз, микоплазмоз, трихомониаз.
• ВПЧ и его онкогенные подвиды;
• клещевой энцефалит и боррелиоз;
• кандидозная инфекция;
• листериоз;
• инфекция хеликобактер пилори.

И это лишь часть наиболее распространенных инфекций, которые можно выявить при помощи ПЦР. ПЦР анализ крови активно применяется в гинекологической сфере медицинской практики, а также в таких областях, как:

• пульмонологическая;
• фтизиатрическая;
• гастроэнтерологическая;
• онкологическая;
• многие другие разделы медицины.

Правила сбора материала на анализ

Чужеродные ДНК и РНК можно выявить, обследовав разнообразные биологические жидкости конкретного человека. Для того чтобы обследовать человека на присутствие определенных инфекций, передаваемых половым путем, необходимо взять на пробу выделения из половых органов (мазок или соскоб) больного и его мочу.

Если возникла необходимость обследовать человека на различного рода инфекции (ВИЧ, герпес, гепатит и другие), то берется ПЦР анализ, для чего используется кровь больного.

Чтобы диагностировать герпетическое поражение, мононуклеоз, нужно взять мазок из полости рта больного. Для подтверждения ЦМВИ для осуществления анализа берется моча больного. Возникают случаи, когда обследуют спинномозговую жидкость для выяснения причин возникших неврологических отклонений.

Врач-пульмонолог при этом обследует методом ПЦР мокроту и жидкость из плевры конкретного больного.

Если у новорожденного ребенка возникло подозрение на внутриутробное инфицирование, врачи берут анализ околоплодных вод у беременной женщины и кусочек тканей плаценты.

Сдача анализа: особенности процедуры и расшифровка результатов

Все пациенты, обследуемые по методу ПЦР, получают наиболее достоверный результат. В данном случае возникновение ошибок практически исключено. Результаты данного анализа готовятся достаточно быстро, что облегчает постановку диагноза и обеспечивает своевременное назначение лечебных мероприятий.

Достоверность результата ПЦР напрямую зависит от правильности сдачи материала на обследование. Материал не должен быть загрязнен, иначе результат исследования не будет объективен. К наиболее важным рекомендациям перед сдачей анализа ПЦР относятся следующие требования:

1. Запрещено проявлять половую активность за сутки до проведения анализа.
2. Анализ крови на инфекции необходимо сдавать на голодный желудок в утреннее время.
3. Моча сдается утром в стерильный контейнер.

Результат анализа будет готов через 1,5-2 суток после проведения рассматриваемой процедуры. Встречаются такие ситуации, когда результат может быть подготовлен в тот же день.

Расшифровка результатов

Результат данного вида обследования может быть положительным и отрицательным. Отрицательный результат анализа крови говорит о том, что инфекционных элементов в сданном материале нет. Большое количество проведенных анализов ПЦР показывает отрицательный анализ.

Положительный анализ ПЦР подтверждает тот факт, что в сданном материале обнаружены инфекционные агенты и необходимо качественное, максимально эффективное лечение больного.

Результат может быть положительным, но какие-либо проявления заболевания отсутствуют. Это говорит или о начале заболевания, или о его носительстве. Если выявлено носительство болезни, то никакие лечебные мероприятия не требуются. Просто необходимо наблюдаться у специалиста. Примерами таких заболеваний являются:

• папилломавирусная инфекция;
• герпес и др.

Обычно их обнаруживают в слюне, соскобе из цервикального канала, уретре. Однако необходимо помнить, что больной человек может заразить абсолютно здоровых, несмотря на то, что его данная болезнь никак не беспокоит. Заболевание может перейти в хроническую форму. Следует отметить, что в тех случаях, когда ПЦР анализ крови показал положительный результат, назначение лечебных мероприятий просто необходимо.

Анализ ПЦР имеет еще и количественную характеристику. Количественный результат оценивает только специалист, он индивидуален для разных инфекций. Основываясь на количественной характеристике, врач способен понять, насколько активен данный патологический процесс, поставить точную стадию развития конкретного заболевания. Благодаря анализированию полученных результатов специалист может выбрать необходимый препарат и, возможно, пересмотреть дозировку препарата.

Точность ПЦР диагностики

Специалистам дают ПЦР 3 важнейших характеристики, среди которых выделяют:

1. Точность.
2. Специфичность.
3. Чувствительность.

Диагностика инфекций методом ПЦР имеет большую вероятность обнаружения инфекционных агентов. ПЦР анализ крови и других жидкостей высокоспецифичен. С его помощью можно легко выявить конкретный инфекционный процесс. Диагностика ПЦР обладает высокой чувствительностью. Если в исследуемом материале содержится минимальное количество инфекционных агентов, метод ПЦР будет всегда положителен.

Наиболее редко бывает ложноположительный результат. Если инфекции нет, то и результат отрицателен.

ПЦР на скрытый инфекционный процесс

Если у человека подозревают ИППП, то назначают анализ крови на скрытые инфекции. Половые заболевания можно выявить лишь путем обследования больного. Скрыто могут протекать такие заболевания, как:

• хламидиоз;
• уреаплазмоз;
• гонорея;
• герпес;
• гарднереллез;
• микоплазма.

Вышеперечисленные половые инфекции достаточно распространены и при этом коварны. На начальной стадии развития заболевания они не дают яркой симптоматики, и больные не обращаются за помощью. ПЦР анализ крови, соскобы со слизистой мочеиспускательного и цервикального канала обязательны при подозрении на эти инфекции.

ИППП очень негативно влияют на репродуктивную систему. Они способны вызвать бесплодие или пороки у плода. В связи с этим перед тем, как планировать беременность, нужно сдать анализ ПЦР.

Популярностью пользуется ПЦР на 12 инфекций. Диагностика методом ПЦР 12 проводится благодаря сдаче мазков из половых органов. Забор материала производится через 2 часа после акта мочеиспускания. За 2 дня до исследования нельзя вводить во влагалище суппозитории и проводить спринцевания. Результат анализа будет готов уже через 2 дня.

Стоимость ПЦР колеблется в зависимости от исследуемой инфекции. Цена находится в диапазоне от 200 до 500 рублей за каждую инфекцию. Войти и обследоваться в частной лаборатории можно и самостоятельно, без направления врача.

ПЦР (полимеразная цепная реакция) – это высокочувствительный специфический метод диагностики вирусных заболеваний, который проводится с помощью молекулярно-генетического исследования крови пациента. Такой метод диагностики способен обнаружить также и наследственные болезни. С помощью ПЦР определяют не только диагноз, а еще и стадию, на которой находится заболевание. Поговорим что такое диагностика инфекций методом ПЦР, узнаем о значениях результатов и многое другое.

Разработчиком метода полимеразной цепной реакции стал американец Кэри Мюллис, создав его в 1983 году. В 1993 году Кэри получил Нобелевскую премию в области химии.

Анализ ПЦР является золотым стандартом в диагностике заболеваний. Без этого метода невозможно было бы постановить окончательный диагноз и, следовательно, применить адекватное лечение. Очень часто анализ стает единственным методом для выявления активных инфекций в организме в то время, как другие методы оказались не эффективными.

Метод полимеразной цепной реакции

Подробнее о методе полимеразной цепной реакции.

В основу теста входит многократное удвоение ДНК или РНК, которое осуществляется с помощью ферментов и проводится в лаборатории. Таким образом образовывается нужное для визуального анализа количество материала. При выполнении ПЦР проводится копирование только нужного участка, который соответствует заданным параметрам.

К примеру, происходит помещение биологического материала человека, в котором вероятно присутствует возбудитель, в амплификатор. Затем, ферменты, добавленные в реактор, связываются с патогеном, и получается синтез копии ДНК и РНК. Копирование ведется несколько этапов, что образует цепную реакцию, образовывая сотни копий из одного генетического материала. После этого лаборанты проводят анализ и сравнивают результаты с информацией в базе данных. ПЦР выдает как качественный, так и количественный результат исследования.

Данный метод широко распространен в медицине, он используется для проведения опытов с мутацией и сращиванием ДНК, а также для других экспериментов.

Преимущества диагностики вирусных инфекций методом ПЦР

• Чувствительность теста очень высока, и может обнаружить даже единичные агенты возбудителя. Чувствительность составляет 10-1000 клеток одного образа материала. Для сравнения можно сказать, что чувствительность микроскопических тестов не превышает 105 клеток;
• Специфичность ПЦР находится на высоком уровне, что дает возможность определить участок РНК и ДНК возбудителя. Таким образом, тест не выдает ложных показателей;
• ПЦР непосредственно обнаруживает агент вируса, возбудителя инфекции в исследуемом образце;
• Тест проводится очень быстро. Уже через 4 часа можно оценить результаты исследования;
• Универсальная методика исследования позволяет обнаружить разные виды возбудителя. Можно использовать одну пробу для выявления нескольких видов агентов возбудителя.
• С помощью ПЦР можно провести доклиническую и ретроспективную диагностику. Доклиническая диагностика выявляет патогены еще до наступления болезни, а ретроспективная делается после перенесенной болезни. Это позволяет проводить исследование в инкубационный период болезни, когда жалоб на здоровье еще нет, но при этом пациент уже заражен вирусом. Также, возможно выявить латентную инфекцию, которая протекает бессимптомно.
• ПЦР можно проводить на основе образцов архивного материала или на основе биологических остатков. Это помогает идентифицировать личность или установить отцовство.

Кроме того, диагностика методом ПЦР в последнее время активно развивается. Так, появляются все более новые тесты для исследования. Таким образом, цена на проведение таких тестов с каждым годом падает, что дает возможность доступа к методу многим лицам.

Инфекции которые можно обнаружить

Инфекции, которые можно обнаружить в организме человека с помощью полимеразной цепной реакции:

• гепатиты А, В, С, G;
• мононуклеоз;
• цитомегаловирусная инфекция;
• инфекция герпеса, 1 и 2 типов;
• инфекции, передающиеся половым путем (хламидиоз, трихомониаз, микоплазмоз, уреаплазмоз и другие);
• туберкулез;
• онкогенные вирусы (папиллома);
• листериоз;
• боррелиоз;
• клещевой энцефалит;
• хеликобактерная инфекция, а также другие инфекции.

Диагностика методом ПЦР широко распространенна во многих отраслях медицины, например в урологии, гинекологии, фтизиатрии, онкологии и других.

Анализ

Результаты и сроки анализа ПЦР, проведенных методом полимеразной цепной реакции, выдаются уже через двое суток после сдачи образцов для исследования. Иногда, результаты изготовляются в течение 1 дня.

Правила забора материала для исследования методом ПЦР

Практически все пациенты, которые сдают материал для проведения ПЦР диагностики, могут рассчитывать на достоверные и быстрые результаты. Однако, чистота анализа также зависит и от пациента, собирающего материал. Материал для анализа должен собираться в условиях, исключающих его загрязнение, что может существенно повлиять на объективность результата.

• за сутки до сдачи анализа избегать половых контактов;
• забор крови происходит только утром, натощак, это значит, что нельзя употреблять пищу и напитки перед взятием крови;
• моча для анализа сдается в стерильном контейнере, при этом собирается только утренняя моча.

Для исследования методом ПЦР собирается тот биологический материал, в котором предположительно могут быть патогенные бактерии. Это может быть:

• кровь,
• слюна,
• образцы слизи из слизистых оболочек,
• плацента,
• моча,
• мокрота,
• соскоб,
• околоплодные воды и плевральная жидкость.

Для проведения анализов на половые инфекции, берется образцы выделений из половых органов.

Для берутся образцы крови. Чтобы провести анализ на мононуклеоз берется мазок из зева, для диагностики ЦМВИ – образцы мочи. Спинномозговая жидкость берется для диагностики поражений нервной системы человека.

При внутриутробных инфекциях производят забор тканей плаценты и околоплодных вод.

Результаты анализа

Результаты анализа ПЦР могут быть положительными и отрицательными. При отрицательном результате анализа ПЦР, организм пациента не подвергался заражения и, следовательно, является здоровым. При положительном результате можно утверждать факт наличия инфекционных возбудителей в организме пациента.

Существует также здоровое носительство бактерий, при котором симптомов заболевания у пациента нет. В таком случае результат ПЦР окажется положительным. Но говорить здесь об активной инфекции нельзя. При этом лечение проводить не нужно, но наблюдаться регулярно у врача необходимо. Такое явление распространено при таких заболеваниях, как ВПЧ, герпес, ЦМВИ и других.
Очень важно помнить, что носитель инфекции может передать ее здоровому человеку. Также, сам носитель может перейти в стадию хронического протекания болезни.

ПЦР диагностика - видео пояснение

В современной медицине большее значение уделяется высокоточной лабораторной методике исследования, основанной на Полимеразной Цепной Реакции. Благодаря применению ПЦР – технологий появилась возможность провести анализ на молекулярно-генетическом уровне и выявить у пациента острые и хронические формы наследственных и инфекционных заболеваний задолго до появления клинических симптомов.

Что такое ПЦР – диагностика

Этот метод был разработан американским биохимиком и лауреатом Нобелевской премии Кэрри Мюллисом в 1984 году.

Многие квалифицированные специалисты сталкиваются с ПЦР-исследованием каждый день и не представляют без его результатов точного диагностирования большинства активных форм патологий в тех случаях, когда не срабатывают иммунологические и микробиологические методики. Очень часто бывает так, что разные вирусы могут вызвать одни и те же клинические симптомы, ПЦР-анализ позволит определить возбудитель при самой малой его концентрации в биоматериале и выявить даже единичные клетки вирусов или бацилл.

О ПЦР-диагностики на видео

Основу ПЦР-диагностики представляет проведение в специальных лабораторных условиях многократной амплификации (умножения) определенных участков ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты) — генетического материала человека.

Весь технологический процесс копирования состоит из несколько этапов:

1. Денатурации – подготовке образца, посредством повышения температуры биоматериала (до 95 °C) происходит расщепление 2-х цепочной ДНК на две отдельные нити.
2. Отжига — исследуемый биоматериал остужают и добавляют к нему азотистые праймеры (реагенты), имеющие способность специфично распознавать последовательности в молекуле ДНК, характерные только для болезнетворного агента, и соединяться с ними.
3. Элонгации – самой полимеразной реакции, происходит достраивание уникального молекулярно-генетического участка, в каждом из соединений с праймером образуется новая, структурно дополняющая дочернюю, цепь ДНК.

Весь цикл повторяется 20 – 30 раз. В конечном итоге образуется то количество комплементарных нитей ДНК, которое достаточно для визуального анализа и сравнения результатов с имеющимися данными о клеточном строении различных возбудителей. Определяют вирус, природу его появления, устанавливают силу его воздействия на организм и количество имеющихся бацилл. Эта информация представляет большую ценность для лечащего врача при назначении эффективных методов терапии и подборе лекарственных препаратов.

Методики ПЦР – диагностики отличаются от других лабораторных методов следующим:

• прямым определением наличия возбудителей;
• высокой чувствительностью, специфичностью и универсальностью процедуры выявления вирусов;
• быстротой выполнения анализа;
• возможностью диагностирования бессимптомных патологий.

Результаты исследования можно фотографировать или вносить в информационные носители для возможности их оценивания независимыми экспертами.

Как правильно подготовиться к сдаче анализа ПЦР?

Для исследования используют различные биоматериалы:

• кровь;
• слизь;
• слюну;
• мочу;
• мокроту;
• соскобы эпителия;
• сок простаты;
• соскобы слизистых оболочек;
• околоплодные воды;
• ткань плаценты;
• спинномозговую, суставную или плевральную жидкости;
• выделения половых органов.

Современное лабораторное оборудование и профессионализм врача-лаборанта гарантирует пациенту, которому проводят ПЦР-анализ получение достоверного результата. Но точность исследования зависит и от правильной подготовки к тесту, и от соблюдения всех рекомендаций по отбору биоматериала.

Правильно подготовиться к анализу не сложно, важно выполнить все существующие правила:

1. За сутки до исследования не вступать в половые контакты.
2. Отменить занятия в спортзале.
3. Не посещать перед обследованием баню или сауну.
4. Ужинать накануне следует не позднее 20 часов, не увлекаться острой и жирной пищей, не принимать спиртное.
5. Венозную кровь нужно сдавать в утренние часы, перед процедурой не есть, не пить и не курить.

Как сдают анализы ПЦР женщины и мужчины – особенности процедуры

Главным общим требованием к отбору биоматериала – получение в образец максимальной концентрации микроорганизмов и отсутствие нежелательных примесей – слизи, крови или гноя.

При обследованиях на инфекции, которые передаются при половых контактах (уреаплазмоз, гарднереллез, хламидиоз, микоплазмоз, трихомониаз) забирают выделения из половых органов:

• у мужчин производится взятие мазка или соскоба из мочевыводящего канала (уретры);
• у женщин – мазка или соскоба из влагалища, цервикального канала.

При взятии материала из урогенитальных путей важно избежать попадания примесей. С этой целью у мужчин соскоб берут не ранее 2-х часов после последнего мочеиспускания, у женщин — с учетом дней цикла месячных. Избыток слизи или гноя удаляется стерильными ватными тампонами, биоматериал отбирают при помощи специальных пластиковых зондов – при этом снижается вероятность попадания крови в образец.

Процедура взятия урогенитального соскоба довольно болезненна для мужчин , именно поэтому для анализа часто используется первая порция мочи после ночной задержки, которая содержит наибольшее количество эпителия. Мочу собирают в стерильный контейнер с плотно прилегающей крышкой и доставляют в лабораторию не позднее, чем спустя два часа после отбора. В лаборатории для последующей работы получают клеточный осадок мочи путем центрифугирования.

Какие инфекции входят в комплекс ПЦР-12?

ПЦР-диагностику активно используют опытные специалисты. Наиболее востребованной считается диагностика вирусов и инфекций.

В настоящее время методики Полимеразной цепной реакции расширяют возможности проведения исследований — введение геннотипирования и сращивания фрагментов ДНК тканей получили широкое распространение в различных областях современной медицины:

• гинекологии;
• урологии;
• пульмонологии;
• гастроэнтерологии;
• гематологии;
• онкологии.

Где можно недорого сдать анализы в УРФО?

Современные методы ПЦР-диагностики постоянно развиваются. Совершенствуется сама методика, происходит появление новых разновидностей ПЦР и новых тест – систем, используемых для цепной реакции. Благодаря этим нововведениям, стоимость этих анализов становится более доступной для пациентов.

ПЦР-диагностика (полимеразная цепная реакция) применяется для выявления активной стадии заболевания в комплексе с уже традиционными исследованиями, когда нет реакции иммунологическими и микробиологическими методами диагностики.

Определенный период ПЦР-диагностику применяли только в научных целях, и только начиная с конца XX века и начала 21-го этот анализ стал своеобразным «золотым стандартом», приносящим большую пользу в различных областях медицины.

В чем суть ПЦР-диагностирования?

ПЦР-диагностика, в отличие от , способного обнаружить следы пребывания антител (АТ), устанавливает не только первопричины патологического состояния, но и выявляет наличие на специфическом определённом участке ДНК или РНК при помощи ферментов в лабораторных условиях.

Анализ методом ПЦР имеет высокую точность, исключая возможность ложных реакций и совершенно необязательно брать кровь из вены на исследование, достаточно небольшого количества образцов ткани, биологической жидкости.

К вышеперечисленному варианту биологической среды материала для тестирования, содержащего предполагаемый инфекционный возбудитель по решению врача могут быть назначено несколько вариантов сразу, в том числе это может быть:

• мазок (выделения из половых органов);
• соскоб со слизистой (рта, носа, половых органов);
• слюна , мокрота или плевральная жидкость;
• сок простаты , исследование секрета предстательной железы на наличие вредителя;
• плацентарная ткань или околоплодная жидкость;
• общий анализ мочи на исследование осадка (после центрифугирования) при необходимости выявления микобактерий туберкулеза;
• спинномозговая жидкость на предмет выявления инфекционного поражения ЦНС;
• забор клеток или тканей (биоптата) из печени, двенадцатиперстной кишки, желудка и пр.

Данные образцы помещаются в специальный реактор и анализируются при многократном удвоении (амплификации) исследуемых фрагментов ДНК, путём повторных циклов репликации и денатурации с добавлением специфических ферментов для синтеза. По типу цепной реакции данный метод идентифицирует вид и индивидуальные характеристики ДНК или РНК . В конечном итоге процесс проведения ПЦР при сравнительном анализе клонированного генетического материала позволяет выявить даже единичные клетки живого вируса, легко отличая уреаплазму от микоплазмы или же .

Преимущества и недостатки ПЦР-диагностики

У этого ПЦР-диагностики есть как преимущества, так несколько недостатков.

Преимущества диагностики:

• определение возбудителя даёт прямое указание на наличие в генетическом материале нетипичного участка ДНК или РНК;
• ПЦР диагностика дает 100% точности благодаря присутствию в исследуемом материале частиц нуклеиновых кислот (фрагменты ДНК или РНК) характерных только конкретному вирусу или бактерии;
• высокая чувствительность ПЦР-системы, в сравнении с иными методами диагностики. ПЦР-анализу для определения наличия возбудителя достаточно одной клетки живого вируса (10-100 клеток в пробе), что даёт возможность обнаружения патогенного микроорганизма на раннем этапе заболевания при отсутствии выраженных симптомов, и в запущенных формах;
• высокотехнологичная автоматизированная амплификация методом ПЦР повышает скорость выполнения анализа, проводя тестирование в день забора (выделяя не более 4-6 часов на диагностику). Это повышает производительность и даёт преобладание над культуральными методами исследования;
• универсальность анализа позволяет с помощью генетического материала ДНК или РНК, забранного различными вариантами, обнаружить нескольких возбудителей из одной биологической пробы.

Если говорить о недостатках , то, учитывая чувствительность ПЦР-системы, одним из малоприятных моментов, являются:

• изменчивость микроорганизмов. Недостаток состоит в том, что микроорганизмам присуща мутация, приводящая к изменению исследуемого генотипа возбудителя. И тест-система ПЦР в амплифицируемом участке генома не может уловить гибрид уже эволюционирующего возбудителя, так же как и иммунная система человека не распознает его, поэтому реакции на определение наличия инфекционного заболевания не произойдёт. Но для этого проходят различные разработки для усовершенствования метода ПЦР;
• возможность получения ложноположительного или ложноотрицательного результата. Чтоб не столкнуться с ложными результатами на одном из этапов ПЦР-диагностики, её нужно проходить внимательно, без нарушения процесса, соблюдая правила забора материала. Образцы могут поменять свою структуру или вовсе разрушиться, что может привести к ложноотрицательному или ложноположительному результату. Следует понимать, что такой результат может быть, когда инфекция уже убита, но мертвые клетки ещё не успели обновиться и при клонировании были учтены. Поэтому на ранних сроках после проведённого лечения применяют другие методы (например, ), а уже после полного выведения из организма неактивных возбудителей инфекции проводиться анализ-контроль методом ПЦР. И уже лечащий врач принимает окончательное решение о целесообразности терапии, взяв во внимание все аргументы «за» и «против».

Подготовка к ПЦР-диагностике и условия сдачи анализов

Обратить внимание стоит на простую подготовку к ПЦР, для этого необходимо строго выполнить все рекомендации лечащего врача и соблюдать минимум несколько неоспоримых условий для более точного результата.

В зависимости от метода забора материала на обследование необходимо помнить, что:

• для диагностики с помощью венозной крови пациенту необходимо сдавать анализ натощак, исключая даже употребление жидкости;
• для сдачи мазка необходимо воздержаться от полового контакта как минимум на пару суток, допускается провести гигиену половых органов с вечера, но не в день сдачи анализа. Стоит выбрать оптимальное время для проведения исследования с учетом: за два дня до или после менструального цикла;
• для любого метода забора материала следует прекратить за пару недель до сдачи применение антибактериальных лекарственных препаратов, предварительно проконсультировавшись с лечащим врачом, поскольку это может повлиять на достоверность результата;
• для сдачи анализа мочи на определение наличия возбудителей необходимо не только соблюдать стерильность и гигиеничность, но и качественность собранного материала для исследования, несущего более точную информацию. Поэтому допустимо выдержать 2-3 часа с последнего мочеиспускания до сбора мочи или использовать утренний образец, дающий большую вероятность показать наличие воспалительного процесса.

Применение ПЦР и выявляемые заболевания

Для поиска возбудителей многих заболеваний не следует игнорировать вышеупомянутые рекомендации, а назначенное обследование врачом именно методом ПЦР-диагностики может обезопасить от серьёзных осложнений не только взрослого человека, но и маленького, ещё не родившегося, ребёнка в утробе матери.

Ведь чаще некоторыми типами вирусов (ВПЧ) страдает именно женская половина населения, существенно увеличивая возможность возникновения рака шейки матки или бесплодия. И, ввиду возможного негативного влияния на течение беременности и на развития плода, следует учитывать, что разнообразные группы микроорганизмов, передаваемых половым путём или при иммунодефиците трудно отнести к той или иной группе возбудителя, так как они очень взаимосвязаны (например, ТОРЧ-инфекции и ИППП). Зато полимеразная цепная реакция способна найти чужеродную структуру, определив конкретный тип вирусного ДНК в женском организме.

Расшифровка результатов анализа позволяет подтвердить или опровергнуть наличие болезней. Охватывая большой спектр возбудителей такой анализ очень актуален для своевременного выявления многих инфекций, таких как:

• обнаружение ВИЧ-инфекции . Тяжёлого нарушения иммунитета инфекцией, поражающей в первую очередь иммунокомпетентные клетки, имеющиеся на поверхности иммунной системы на рецепторах СD4, впоследствии теряющих свою возможность защищаться от инфекций, и перестают реагировать на присутствие в плазме крови РНК вируса. В случае положительного результата при анонимном обследовании, его проходят повторно с добавлением дополнительных исследований;
• вирусные гепатиты, чаще всего - гепатита С (содержащего РНК возбудитель), который в силу своей легкой переносимости трудно диагностировать иными методами, ведь ПЦР-метод является более оптимальным для распознания возбудителя в крови или биоптате печени. проявляет себя на поздней стадии, формируя злокачественный воспалительный процесс. Однако стоит учесть, что если при сдаче анализа на наличие антител в крови (АТ) результат будет положительный, а ПЦР-анализ даст результат отрицательный, это может говорить о наличие вируса в организме в очень низком количестве, либо поражённые клетки находятся в ожидающей стадии в геноме клеток печени без выхода в кровяное русло. В таком случаи будет проводиться ряд повторных исследований для окончательного диагноза и методики лечения;
• онкогенные вирусы, такие как ВПЧ (вирус папилломы человека) имеющих более 100 различных типов вируса, передающийся половым путём или во время медицинских манипуляций, через родовые пути проходит заражение новорожденного от матери, если она носитель папилломавирусной инфекции;
• ИППП (инфекции, передающиеся половым путем);
• подходит для выявления всех ЗППП ( , гарднереллез, ) и ТОРЧ-инфекций;
• с большой степенью точности указывает на наличие инфекции мононуклеоза , характеризующегося поражением лимфатической и ретикулоэндотелиальной системы (увеличением лимфатических узлов, селезёнки, печени), можно выявить с помощью ПЦР-диагностики, взяв в качестве исследуемого материала сыворотку крови. Болезнь Филатова по внешним параметрам может проявиться как высыпания, желчность кожного покрова, белый налёт на языке.
• , проникающая в кровь больных СПИДом и перенёсших трансплантацию органов с применением препаратов для подавления иммунитета;
• герпетическая инфекция , представляя из себя тот или иной тип герпеса, способного поразить половые органы, слизистую оболочку глаз или кожный покров;
• туберкулез . При наличии основных симптомов болезни назначается прохождение ПЦР-анализа после результатов бронхоскопии, позволяя диагностировать активную стадию туберкулёза гораздо быстрее, чем с помощью бактериологического или бактериоскопического метода;
• вирусное инфекционное заболевание, такое как клещевой энцефалит (Боррелиоз). Характеризуется поражением клеток нервной системы, интоксикацией, воспалением головного мозга и впоследствии развитием паралича. Для обнаружения антигена с помощью ПЦР-диагностики для выделения РНК-вируса берётся кровь и спинномозговая жидкость.
• выявление хеликобактерной инфекции (приводящая к хроническому гастриту, язвенной болезни, опухоли желудка) методом ПЦР-диагностики позволяет обнаружить ДНК (генетический материал) хеликобактер пилори в биоптате, кале, слюне, различая штаммы по степени злокачественности.

ПЦР-диагностика инфекций развивается ускоренными темпами и успешно используется в онкологии, гинекологии, урологии, гастроэнтерологии, вирусологии и список постоянно пополняется, но не ограничивается только поиском возбудителей инфекционных заболеваний. Среди остальных практических применений ПЦР-метода можно также выделить использование исследования для установления отцовства и идентификации личности.

Диагностика инфекционных заболеваний – бактериальных и вирусных – направлена на раннее выявление возбудителей, что позволяет назначать раннюю и максимально эффективную терапию. Самым современным способом диагностики инфекций является ПЦР или полимеразная цепная реакция. Так что же это за метод, и для чего он нужен?

Суть полимеразной реакции

Любой микроорганизм и вирус содержат в своей структуре молекулы ДНК или РНК. У каждого из них эти соединения уникальны, поэтому, если выделить в анализе крови у детей или взрослых нуклеиновые кислоты, можно с абсолютной точностью поставить диагноз.

К сожалению, концентрация ДНК в образцах крови или других биологических материалах достаточно низка и с помощью обычных методов диагностики определить ее не получается. Чтобы справиться с этой проблемой, была изобретена полимеразная цепная реакция.

Сущность ПЦР заключается в специальной обработке образца крови, в результате чего в ней увеличивается концентрация ДНК молекул, определение типа которых в дальнейшем позволяет установить вид возбудителя и поставить диагноз.

Как сдать кровь на ПЦР

При подготовке к анализу следует придерживаться общих рекомендаций: не пить и не есть непосредственно перед анализом крови. Хотя для сдачи крови на ПЦР можно так строго не придерживаться этих требований, так как точность исследования не зависит от того, на сытый или голодный желудок был взят анализ.

Какие заболевания можно выявить с помощью ПЦР

С помощью ПЦР можно выявить практически любые вирусные и бактериальные заболевания. Для анализа используется не только кровь, но и другие биологические материалы: сперма, слюна, мазки из уретры и с шейки матки. Анализ крови будет информативен в том случае, если возбудитель конкретного заболевания проникает в кровь человека. Поэтому ПЦР крови назначают при следующих заболеваниях:

• вирусные гепатиты А, В, С, D и TT;
• цитомегаловирус;
• герпетическая инфекция (вирусы герпеса 1, 2 и 4-го типов);
• ВИЧ-инфекция
• энтеровирусная инфекция;
• опоясывающий лишай;
• краснуха;
• токсоплазмоз;
• инфекционный мононуклеоз;
• листериоз.

Если же взять во внимание возможность проведения ПЦР других биоматериалов, то в список заболеваний, выявляемых с помощью ПЦР, следует добавить:

• гарднереллез;
• сальмонеллез;
• (порядка 100 различных штаммов вируса папилломы человека);
• трихомониаз;

Особо актуально в настоящее время ПЦР анализа крови беременной на так называемые : цитомегаловирус, токсоплазмоз, краснуху и . Связано это с тем, что упомянутые заболевания могут привести к аномалиям развития плода.

Преимущества ПЦР

Недостатки анализа

ПЦР является высокотехнологичным методом исследованием и предъявляет высокие требования к оснащению лаборатории. Помещение, где делают анализ, обязательно должно быть оснащено фильтром биологической очистки, так как в воздухе постоянно присутствуют частицы кожи, слюны, содержащие в своем составе молекулы ДНК. Несоблюдение техники работы с биоматериалами может стать причиной неверного результата.

Анализ крови – расшифровка у взрослых (ПЦР)

Трактовка результатов этого исследования не представляет сложностей, потому что отсутствует таблица норм анализа крови на ПЦР. В бланке результатов могут фигурировать лишь две фразы:

• отрицательный результат – возбудитель, на который проводился анализ, не выявлен;
• положительный результат – в организме имеется возбудитель указанного заболевания.

Следует знать, что ПЦР может быть положительной даже при отсутствии клинических симптомов заболевания! Расшифровка анализа крови на ПЦР у детей не отличается от таковой у взрослых.

Кому нужно сдать анализ на ПЦР

Любой человек может сдать кровь для исследования. Прямым показанием для исследования является подозрение на инфекции передающиеся половым путем ( , гарднереллез, ВИЧ-инфекция). При случайном незащищенный половом контакте только ПЦР поможет поставить диагноз на ранней стадии, если человек заразился каким-либо заболеванием. В обязательном порядке кровь на TORCH-комплекс сдают беременные женщины. А также женщины, только .